大数跨境

三款免费的流式分析软件,总有一款适合你

三款免费的流式分析软件,总有一款适合你 Sophie外贸笔记
2021-09-16
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导读:FCSAlyzer(跨平台)、Flowing、FCSight

FCSAlyzer(跨平台)

FCSalyzer是由Sven Mostböck开发的,2021年3月已更新到0.9.22α版,文件大小仅500KB左右(两个jar文件,如果其中一个运行不正常,用另一个即可)。

该软件完全免费,单个文件,下载即可使用,由于是JAVA语言编写,故可跨平台,意味着你的电脑如果是苹果系统,也可以用。平时可放在优盘中随身携带(windows系统需具备JAVA虚拟机运行环境)。

常用分析操作指南:

新建分析模板(快捷键Ctrl+N)或打开已有的分析模板(快捷键Ctrl+O),选择您要画的图形(点图或直方图),进行设门等操作,最后点击“分析数据”菜单下的“统计结果”(快捷键Alt+S)命令,即可显示各类细胞百分比。

在分析时,您可以使用快捷键Ctrl+A全选所有图形,再用Ctrl+右箭头切换至下一个文件,或用Ctrl+左箭头切换至上一个文件,或用Ctrl+Q在当前选择的图形上导入新的数据分析。这些快捷操作均类似于经典的CellQuest。

运行环境提示:如果双击该文件无法运行或提示出错,可能您的WINDOWS或MAC、Linux系统未安装JAVA运行环境(JRE),请从下列地址下载:https://www.java.com/zh_CN/download/

软件界面预览和简介

Flowing(分析流程可视化)

5年前出品的免费流式分析软件——Flowing,尽管5年多未更新,但是其中的功能绝不逊色于大多数商业流式软件。

这个软件是由芬兰的Perttu Terho等人开发,采用流程图方式分析,特色十足且清晰,由于与FlowJo的分析流程略有变化,所以一定要注意下面的步骤。

我稍微挑几个大家常用的、急需的功能用这个软件演示一下。

1、普通的散点图和密度图、设门相关 软件的分析流程和其它软件略有不同,需要先利用Visualization Tools下面的Plot或Histogram先绘制出图框(可绘制普通散点图,也可绘制密度图、直方图、叠加直方图,叠加直方图后面讲),再选择FCS文件(LMD文件也支持,但是我测试发现,大的LMD文件容易出错,所以还是建议优先用FCS文件)。

更改坐标参数,和其它软件类似,都是在坐标上鼠标右键选择。设门,则是在图上空白区域点鼠标右键,选择Create new Region,至于门的名称、颜色、逻辑组合、删除,都是在右侧Populations窗口鼠标右键执行,这些功能我觉得比Flowjo好用,尤其是逻辑组合:

2、散点图细胞太多,看不清,想少显示一些 对于获取稀有事件的朋友,会获取百万级别的细胞,此时,细胞群之间的分界就看不清楚,为此,就需减少显示的细胞数量,以便圈门。

Flowjo有这功能,Kaluza直到新的2.0版本才具备此功能,而Flowing在5年前就具备了此功能,而且其选择数据的功能十分多样。

在菜单中,选择Data Reduction Tools下面的Reduce Event Number:

会在主界面出现一个空白框Event Number Reducer:

选中该框,选择FCS文件后,然后鼠标右键选择减少事件的方法,可选择固定的数量,也可选择百分比,可选择从文件头取,也可以按照隔行取事件,最后将这个Event Number Reducer与散点图连接,即可显示数量减少后的图形:

3、特色:让直方图的门自动微调 不同数据文件之间,如果两个峰比较明显,但是其分群位置略有变动,大家经常需要自己去手动调,少许几个文件还好说,如果上百个数据一个个去调,要累死人的。

Flowing就有自动微调功能,不知道是否孤陋寡闻,这个功能我觉得还是非常特色的,很少有软件有此功能。

首先画一个Histogram,然后在上面分别画阳性峰和阴性峰的Region,这一步一定要做:

接着,从菜单Create→Region Control Tools下选择move Regions over Negative and Positive Populations:

将图形与该功能框连接后,默认是显示Non Active的:

鼠标右键点击该框,选择Active Control即可:

至于其中自动调整的算法,有三种算法可选,大多数用第一种,如果峰的分隔不是特别好或第一种调坏了,你可选择后面两种:

接下来用菜单中的Next file in directory或快捷键Ctrl+N切换到下一个文件:

看下图的效果:

4、补偿调节 Flowing的补偿调节虽然没有商业软件可视化拖动滑动条那么简单,但相对来说,也算是比较清晰容易了。

首先选择Create→Data modification tools下面的Compensate Data功能:

出现一个空白框,将该框与已选择FCS文件的散点图连接(注意箭头朝向),然后按照下图的数字标识依次进行操作:Edit modifications→窗口中选择调节补偿的参数,Remove第一个参数 From第二个参数→点击Save之后,调整Spillover值,就可以看到散点图上的图形补偿发生了变化:

5、直方图叠加 选择Create→Visualization Tools下的Overlay Histogram:

接着将其它多个直方图与此框连接(箭头指向此框),即可完成叠加,但是坐标要求名称一致:

这里有FLOWER要问了,我要给直方图加上颜色,好办,只要给那两个普通的直方图加上颜色,叠加直方图也会自动显示透明色的:

6、批量处理和统计 商业软件的批处理都有做进去,Flowing的批处理也一点不逊色。

例如我要统计某个抗原表达率,逐级设门后,最后选择抗原表达的直方图或散点图,鼠标右键菜单中选Create Statistics ,就会出现Statistics框,将常见参数都显示出来了,这只是第一步,接下来在Statistics框上再点击鼠标右键,选择Create StatList,接下来,只需在散点图或直方图上,按Ctrl+N或Ctrl+P前后切换数据,就会看到StatList上不断有数据添加上去,最后只需复制StatList上的数据即可。

软件还有很多强大的功能,足够大伙儿用了。

FCSight 0.1

这是我们网站热心站友haven_t 开发的,之前他开发了CFCS,使用MFC框架进行开发,但只能在windows平台运行,于是在2020年他将所有代码都推倒重来,于是有了这个软件,软件外观如下:


数据文件及路径只能是英文字符,否则无法打开。

下载地址: https://pan.baidu.com/s/1ZBl4vJi70Yb5aQoxqbYPsA 提取码: 8tw6

如对软件有建议,请在论坛内与haven_t 站友交流:https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8493-1-1.html


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